Аналитические хроматографические колонки HPLC Column, Sepax
Имея более 100 хроматографических сорбентов и более 1000 типов различных колонок для жидкостной хроматографии, производимых собственными силами, компания Sepax накопила широкий спектр компетенций и знаний, позволяющих удовлетворить различные потребности наших клиентов в очистке широкого спектра низкомолекулярных и биофармацевтических образцов.
При изготовлении аналитических колонок проводятся:
- Полная диагностика колонок на каждом этапе изготовления.
- Испытания на стабильность и подтверждение характеристик колонок каждой партии в соответствии со спецификацией.
- В процессе производства используется количественный метод выборки.
- Тестирование продукции по монографии фармакопеи США (USP).
- ЖХ/МС анализ продукции (LC/MS).
SEC
Механизм разделения SEC
Разделение основано на соотношении между молекулярной массой отделяемого компонента и размером пор матрицы неподвижной фазы. Подвижная фаза не влияет на разделение молекул на сорбенте. Неспецифическую адсорбцию целевого белка можно эффективно уменьшить, добавив в буфер хлорид натрия.
Характеристики разделения SEC
- Возможность проведения быстрого анализа повышает эффективность обнаружения
- Селективное извлечение биомакромолекул
- Подвижная фаза проста и экологически безопасна. Позволяет работать с водорастворимыми солевыми растворами
- Вводимый объем образца на колонку должен составлять < 10 % от объема слоя колонки, предпочтительно в пределах 5 %
- Следует избегать присутствия твердых веществ в образцах, вводимых на колонку
- Для гель-фильтрации вязкость образцов должна быть максимально снижена
- При гель-фильтрации разделяемые вещества должны иметь соотношение молекулярных масс > 2
Стандартная кривая SRT SEC
Выбирайте хроматографическую колонку с подходящим линейным диапазоном молекулярных масс. MW образца, который Вам необходимо выделить должен находится в пределах линейного диапазона колонки.
Колонки: SRT, 4,6×300 мм, 5 мкм
Состав анализируемого образца:
- Тиреоглобулин, 670 кДа.
- γ-глобулин, 158 кДа.
- БСА, 66 кД.
- Овальбумин, 44 кД.
- Миоглобин, 17.6 кДа.
- Рибонуклеаза А, 13.7 кД.
- В12, 1.35 кД.
Sepax SEC (водорастворимые образцы)
| Тип | Размер частиц
（мкм） |
Размер пор (Å) |
Диапазон разделения белков | Водорастворимые полимеры
Диапазон разделения |
| SRT SEC-100 | 5 | 100 | 100-100 000 | 500-10 000 |
| SRT SEC-150 | 5 | 150 | 500-150 000 | 500-25 000 |
| SRT SEC-300 | 5 | 300 | 5 000-1 250 000 | 1 000-100 000 |
| SRT SEC-500 | 5 | 500 | 15 000-5 000 000 | 2 500-500 000 |
| SRT SEC-1000 | 5 | 1000 | 50 000-7 500 000 | 5 000-1 500 000 |
| SRT SEC-2000 | 5 | 2000 | >10 000 000 | 50 000-〉2 500 000 |
| Zenix SEC-80 | 3 | 80 | ＜10 000 | 500-5 000 |
| Zenix SEC-100 | 3 | 100 | 100-100 000 | 500-10 000 |
| Zenix SEC-150 | 3 | 150 | 500-15 000 | 500-25 000 |
| Zenix SEC-300 | 3 | 300 | 5 000-1 250 000 | 1000-100 000 |
Выбор ВЭЖХ колонки для гель-фильтрации (SEC)
Основные два фактора которые необходимо учитывать: растворимость образца и молекулярный вес аналита.
| Аналит | Подходящий тип колонки |
| Белок | SRT/-C，Zenix/-C，Unix/-C，Nanofilm |
| Вирусный вектор | SRT 500，1000，2000 |
| Антитела | SRT/Zenix/Unix 300 |
| Нуклеиновые кислоты | SRT/-C，Zenix/-C |
| Гепарин / Полипептид | SRT/Zenix 100, 150, 300 |
| Цефало-спорины | Mono GPC 50~100 (жирорастворимый образец） |
| Полимеры | SRT/Zenix (водорастворимый образец）
Mono GPC (жирорастворимый образец） |
| Липиды | Mono GPC 50，100，150，300 |
IEX
Механизм разделения ионообменной хроматографии (IEX )
Разделение достигается за счет конкуренции между ионами образца и ионами подвижной фазы за взаимодействие с ионами противоположными зарядами на сорбенте-ионообменнике.
Характеристики IEX
- Использование градиентного элюирования системы буферных солей в качестве подвижной фазы.
- Величина удерживания и степень разделения компонентов в основном регулируются путем контроля значения pH и ионной силы подвижной фазы.
- На катионообменных колонках задерживаются белки, которые имеют pI, превышающим pH подвижной фазы, тогда как белки с pI, меньшим или равным pH подвижной фазы, вымываются как пики растворителя. Последовательность пиков элюирующихся белков начинается с пика белка с самым низким значением pI; обратное верно для анионообменных колонок.
Выбор колонки Sepax IEX
| Тип | Матрица | Размер частиц
（мкм） |
Диапазон pH | Образцы |
| Proteomix SCX | полистирол / дивинилбензол | 1.7 ,3 ,5 ,10 | 2-12 | pI＞7 белок, полипептид |
| Proteomix WCX | ||||
| Proteomix SAX | pI＜7 белок, полипептид
ДНК, РНК, олигонуклеотиды, сахариды |
|||
| Proteomix WAX | ||||
| Proteomix CV-1 | Специальная колонка для анализа биспецифических антител (BsAb) | |||
| AntibodixTM | Специальная колонка для анализа моноклональных антител (mAb) |
- Функциональная группа:
WCX: -COOH, pKa 4.75 WAX: -N(C2H5)2, pKa 11
SCX: -SO3H, pKa < 1.0 SAX: -N+(CH3)3, pKa 13
- Колонка: PEEK, Материал из нержавеющей стали
| Аналит | Подходящий тип колонки |
| Белки | Proteomix WCX/SCX/WAX/SAX |
| Антитела | Antibodix WCX / Proteomix WCX, SCX |
| Полипептиды | Proteomix WCX/SCX/WAX/SAX |
| Нуклеиновые кислоты | Proteomix SAX |
| Водорастворимые полимеры | Proteomix SCX/WCX(base) / WAX/SAX(acid) |
HIC
Механизм разделения с помощью HIC
Общее для методов HIC и RP. Основаны на различиях в гидрофобности каждого компонента и силе взаимодействия между гидрофобными группами в матрице неподвижной фазы.
Разница. По сравнению с HIC неподвижная фаза RP обладает более сильной гидрофобностью. Следовательно, при элюировании с RP колонки необходимо использовать органические растворители, такие как метанол, ацетонитрил. При работе с HIC-колонкой можно элюировать с использованием более мягкой солевой фазы. Мягкая элюирующая среда может поддержать стабильность биологических макромолекул.
Выбор колонки HIC от Sepax
Применение：
- Анализ и очистка белков и полипептидов (в том числе синтетических полипептидов)
- Анализ соотношения лекарство-антитело (DAR) для лекарств, связанных с антителами (не денатурированные условия)
Требование к образцу：
- Целевой аналит и другие компоненты или примеси в образце должны отличаться по гидрофобности
- Компоненты образца имеют хорошую растворимость в выбранной системе подвижной фазы.
Выбор колонки：
- Если образец нестабилен в системе органических растворителей, предпочтительным является режим HIC.
RP
Механизм разделения с помощью RP
Общее для методов HIC и RP. Основаны на различиях в гидрофобности каждого компонента и силе взаимодействия между гидрофобными группами в матрице неподвижной фазы.
Разница. По сравнению с HIC неподвижная фаза RP обладает более сильной гидрофобностью. Следовательно, при элюировании с RP колонки необходимо использовать органические растворители, такие как метанол, ацетонитрил. При работе с HIC-колонкой можно элюировать с использованием более мягкой солевой фазы. Мягкая элюирующая среда может поддержать стабильность биологических макромолекул.
| Proteomix® RP Полимерная матрица | Силикагельная матрица |
| Proteomix® RP-300（размер пор: 300 Å） | Bio-C18, C8, C4（размер пор: 200Å/300 Å） |
| Proteomix® RP-500（размер пор: 500 Å） | HP-C18 (работает при 100% водной фазы) |
| Proteomix® RP-1000（размер пор: 1000 Å） | BR-C18 (работает при pH1.5~10.5） |
| Proteomix® RP-300（размер пор: 300 Å） | Bio-C18, C8, C4（размер пор: 200Å/300 Å） |
Матрица Proteomix RP основана на сильно сшитых полистирол/дивинилбензольных (ПС/ДВБ) микросферах. Гидрофобные взаимодействия достигаются за счет взаимодействия с фенильными и поверхностно-модифицированными алкильными группами.
Преимущества полимерной матрицы:
- По сравнению с силикагелем полимерная матрица более пригодна для разделения биологических молекул и имеет широкий диапазон pH (1-14)
- Высокая термостойкость: до 80 ℃
- Селективность и эффективное разделение белковых молекул и их родственных белковых фрагментов, таких как mAb и ADC
Применение RP:
- Анализ значения DAR для ADC (полимерная матрица, подвижная фаза органической фазы)
- Анализ пептидной карты, анализ содержания низкомолекулярных лекарств и т. д. (силикагель)
AFFINITY
Аффинная колонка – ProAqa Excel специально разработана для быстрого и точного количественного определения антител во время скрининга клеточных линий или оптимизации биопроцессов и контроля качества. Сорбент состоит изматрицы из однородного PS/DVB со средним размером частиц 20 мкм и размером пор 1000-2000 Å в и пришитым рекомбинантным белком А – лигандом, который может связываться с Fc-содержащими иммуноглобулинами, отличными от IgG3, и подходит для определение содержания Fc-иммуноглобулина в супернатанте культуры клеток СНО на разных уровнях.
Аффинная колонка – ProAqa Excel
| ProAqa Excel | Технические особенности |
| Матрица | PS/DVB (20 мкм, 1000-2000 Å) |
| Лиганд | Рекомбинационный Protein A |
| Размер (внутренний диаметр × длина) | 2.1 мм x 30 мм |
| Материал колонки | PEEK или нержавеющая сталь |
| Максимальное давление | 200 бар |
| Диапазон pH | 1.2-13.0 |
| Максимальная скорость потока | 5 мл/мин |
| Рекомендуемый расход | 1-3 мл/мин |
| CIP | 0.1 M NaOH |
| Связывающий буфер pH | 6.6-7.5 |
| Срок службы | >2000 инъекция |
| Стандартная инъекция | 10 мкл |
| Концентрация обнаружения IgG | 0.029-40 мг/мл* |
| Предел обнаружения | 0.29 мкг |
*UV 280 нм: 0.029 -7.500 мг/мл, UV 300 нм: 0.117-40.000 мг/мл
Похожие товары
Хроматография
Хроматография
Хроматография
Хроматография
Хроматография
Хроматография
Хроматографические колонки
Регулируемые хроматографические колонки (5-7 бар), G-biosciences
