Сорбенты, VDO

VDO поставляет на рынок комплексные решения для очистки биомолекул, включая выбор и разработку сорбентов для разделения и очистки готовой продукции, выбор колонок, масштабирование процессов очистки от небольших испытаний до амплификации на производственной линии и техническую поддержку. Представляем вам линейку хроматографических сорбентов данного производителя. Более подробные технические характеристики сорбентов смотрите в брошюре.

Скачать каталог

Категории: Сорбенты, Хроматография Бренд: VDO Biotech

Руководство по выбору сорбентов для биомакромолекулярной хроматографии

Чтобы быстро и эффективно определить возможную концентрацию и выход, а также активность и основные примеси целевого вещества (белка) необходимо сразу корректно определить методы оценки.
Для этого необходимо знать требования к чистоте конечного целевого белка, его удельную активность, выход и требуемый объем партии сорбента.
В ходе предварительных экспериментов и скрининга хроматографических сорбентов необходимо определить физико-химические характеристики целевого белка и наиболее существенные различия между целевым белком и предполагаемыми примесями по физико-химическим свойствам.
Степень чистоты и выхода целевого белка необходимо сбалансировать между собой для рационального проведения процедур очистки.
Так же следует изучить добавки, часто используемые в процессе синтеза/выделения белка, и их влияние на активность целевого белка.

Наиболее подходящие сорбенты от VDO для очистки различных видов белков:

Рекомбинантный белок	Ni Focurose FF(IDA/IMAC/TED),GST Focurose 4FF， SP/Q/CM/DEAE/MMA/MMC Focurose FF/HP/HF/HPR/XL, PhenyI Focurose FF,Focurose 75PG/200PG
Натуральный белок	SP/Q/CM/DEAE/MMA/MMC Focurose FF/HP/HF/HPR/XL, Phenyl Focurose FF, Focurose 75PG/200PG
Вакцина, вирус	Focurose 4FF, Focurose 30PG/75PG/200PG, SP/Q/CM/DEAE/MMA/MMC Focurose FF/HP/HF/HPR/XL, Focore 400/700
Диагностическое антитело, антиген	arProtein A Focurose HR, Protein G Focurose 4FF, SP/Q/CM/DEAE/MMA/MMC Focurose FF/HP/HF/HPR/XL
Терапевтическое антитело	arProtein A Focurose HR, Protein G Focurose 4FF, SP/Q/CM/DEAE/MMA/MMC Focurose FF/HP/HF/HPR/XL
Плазмидная ДНК	Focurose 6FF, Plasmid Focurose HPR, Q Focurose HPR, Phenyl Focurose FF, Focore 700
Опреснение	Focurose 30PG

SEC

Руководство по выбору сорбента для гель-фильтрации.

Диапазон фракционирования (глобулин Da) продуктов. Соотношение с сорбентами от VDO Biotech.

Vdo-chromatography media SEC

Процесс фракционирования эксклюзионной хроматографии

Выбор сорбента для гель-фильтрации	Набивка колонки	Введение образца
Подходящие сорбенты выбираются в соответствии со свойствами образца и диапазоном фракционирования сорбента.	Высота слоя сорбента в колонке регулируется в диапазоне от 30 см до 60 см. Отношение диаметра колонки к высоте сорбента должно быть в пределах от 1:15 до 1:60. Сорбент должен быть однородный и с подходящей плотностью.	Скорость нанесения на сорбент должна быть не слишком быстрой. Объем пробы может повлиять на результат разделения Для обессоливания объем нанесения может составлять 30% от высоты слоя сорбента; для разделения компонентов объем следует контролировать на уровне ниже 10%.

Стратегия применения сорбентов для гель-фильтрационной хроматографии:

Гель-фильтрация обычно используется для тонкой очистки, где содержание примесей в образце низкое.
Гель-фильтрационная хроматография может использоваться для очистки проб небольшого объема.
Может также использоваться на этапе предварительной очистки для группового разделения (например, обессоливания).
Для разделения методом эксклюзионной хроматографии требуется только один буфер, и тип буфера практически не влияет на результаты разделения. Неспецифическую адсорбцию целевого белка можно эффективно уменьшить, добавив в буфер 150 Мм хлорида натрия.

Вовремя гель-фильтрации молекулы элюируются в порядке убывания их размера и тем самым разделяются. Гель-фильтрация также известна как эксклюзионная хроматография или ситовая хроматография. Смолы для гель-фильтрации представляют собой инертные сферические частицы с пористой сетчатой структурой.

Меры предосторожности при использовании сорбентов на сефарозе:

При работе с колонками соотношение диаметра к высоте слоя сорбента должно быть в диапазоне 1:15 ~ 1:60; противодавление увеличится, если высота сорбента в колонке будет слишком велика.
Вводимый объем образца на колонку должен составлять < 10 % от объема слоя колонки, предпочтительно в пределах 5 %.
Следует избегать присутствия твердых веществ в образцах, вводимых на колонку.
Для гель-фильтрации вязкость образцов должна быть максимально снижена.
При гель-фильтрации разделяемые вещества должны иметь соотношение молекулярных масс > 2.

IEX

Руководство по выбору сорбентов для ионообменной хроматографии.

Vdo Biotech может комбинировать между собой 7 лигандов (DEAE, CM, Q, SP, ANX, MMC и MMA) и 7 матриц (Focurose BB, Focurose FF, Foeurose HP, Focurose XL, Focurose HF, Focurose HPR и Focurose HPL); Тем самым возможно получить до 100 различных типов ионообменных сорбентов, что позволяет подобрать максимально эффективный под каждую конкретную задачу.

Vdo-chromatography media IEX

Принципы выбора ионообменных сорбентов

На начальном этапе очистки выбирают ионообменные сорбенты с высокой скоростью потока и большой емкостью, например Focurose XL.
Для последующей очистки следует выбирать ионообменные сорбенты с высокой емкостью и высоким разрешением, например Focurose FF/XL.
Для тонкой очистки лучше выбрать ионообменные сорбенты с высоким разрешением и выходом целевого вещества, такие как Focurose HP/FF/HPR.
Для очистки образцов с высокой вязкостью используют ионообменные сорбенты с большим размером частиц, например Focurose BB.
Если образец нестабилен при низкой концентрации солей или содержит как полимеры, так и мономеры, следует выбирать сорбенты серии продуктов Focurose MMC или MMA.

Примечание: Все сорбенты серии Focurose BB/FF/HP представляют собой высокопрочные сшитые сорбенты на основе сефарозы, размеры частиц которых указаны в порядке убывания: BB > FF > HP. Разрешение и рабочая скорость потока сорбентов, изготовленных из одной и той же матрицы и лиганда, в основном зависят от размера частиц.

Mix Mode

Структурированные мультимодальные сорбенты.

Vdo-chromatography media MIX ММA Сорбент с лигандом ММА имеет различные типы взаимодействий с молекулами-мишенями. Взаимодействия в основном представляют собой сильные анионные взаимодействия и, во вторую очередь, водородные связи и гидрофобные взаимодействия. В основном используется для промежуточной и тонкой очистки моноклональных антител (удаление белка А, димеров, полимеров, белков клеток-хозяев и нуклеиновых кислот из образцов белка А после очистки) или для тонкой очистки других биомолекул.

Vdo-chromatography media MIX ММC Сорбент с лигандом MMC так же имеет различные типы взаимодействий с молекулами-мишенями. В основном они представляют собой ионное взаимодействие и, во вторую очередь, водородные связи и гидрофобные взаимодействия. Мультимодальный солеустойчивый сорбент, подходящий для промежуточной и тонкой очистки всех биомолекул с электронным зарядом, включая белки, полипептиды, нуклеиновые кислоты и т. д.

Сорбенты серии Focore 700/400 готовят путем присоединения октиламиновых функциональных групп к внутренней сфере ядра микросферы из сефарозы высокой жесткости, причем сфера ядра заключена в инертную внешнюю оболочку. Предел исключения молекулярной массы составляет 700 кДа/400 кДа. В условиях высокой электропроводности целевые вещества с эксклюзивностью более 700 кДа/400 кДа проходят через пространство между шариками (микросферами) и очищаться гель-фильтрацией; примеси с эксклюзионным размером менее 700 кДа/400 кДа будут проникать через поры к внутренней сфере ядра, связываться с функциональными группами октиламина внутри микросферы и адсорбироваться за счет ионного обмена и гидрофобных взаимодействий. Таким образом, образец может быть очищен от примесей, включая низкомолекулярные белки.

Используется для очистки вирусов, вирусоподобных частиц, вирусных векторов и т. д. в проточном режиме.

AFFINITY

Vdo-chromatography media affinity Аффинная хроматография основывается на специфической адсорбции между биомолекулами и молекулами-лигандами (например, антигеном и антителом, ферментом и субстратом, гормоном и рецептором, комплементарными цепями в нуклеиновой кислоте, полисахаридом и белковым комплексом и т. д.). Молекулы-мишени могут быть селективно очищены за счет специфической адсорбции между ними и лигандом-носителем. Сорбенты для аффинной хроматографии получают путем присоединения различных аффинных лигандов к сефарозе. В зависимости от лигандов сорбенты можно разделить на несколько видов.

Аффинная среда для очистки белков с His-метками.

Руководство по выбору сорбентов для очистки His (полигистидин) – меченых белков.

Ионы переходных металлов (Cu2+ > Ni2+ > Zn2+ > Co2+ ) смогут быть связаны координационными связями с донорами электронов (например, атомами N, S, O и т. д.). Оставшиеся пустые орбиты в ионах металлов являются координационными центрами доноров электронов и обычно заняты молекулами воды или растворенными анионами. Когда сила связи между аминокислотными остатками гистидина и ионами металлов высока, то донорные атомы аминокислотных остатков гистидина будут вытеснять связанные молекулы воды или анионы с образованием комплексов с ионами металлов. Таким образом, молекулы белка связываются с поверхностью сорбента. Благодаря этому, меченные белки можно разделить и очистить путем надлежащего выбора лигандов с металлами.

Vdo-chromatography media affinity

Аффинная среда для очистки белков с Gis-метками.

Vdo-chromatography media affinity GST (глутатионтрансфераза) может специфически связываться с глутатионом используя взаимодействия между ферментом и субстратом. Таким образом GST-меченый белок может специфически связываться с аффинным сорбентом с глутатионовым лигандом. Благодаря данному межмолекулярному взаимодействию возможна селективная очистка целевого белка при мягких условиях, что позволяет сохранить характеристики белка.

Аффинные сорбенты для очистки антител.

Данные сорбенты готовят путем конъюгации определенных лигандов (таких как белок А, белок G и т. д.) с высокопрочной сефарозой и широко используют для очистки антител.

Пример очистки антитела:

Аффинные сорбенты для очистки сериновых протеаз.

Аффинные сорбенты Benzamidine Focurose FF (LS) и Benzamidine Focurose 4FF (HS) разработаны для очистки сериновых протеаз. Их получают путем конъюгации лиганда п-анизидина, ингибитора сериновой протеазы широкого спектра действия, с сефарозными микросферами Focurose FF и высокопрочной сефарозой Focurose 4FF.

Аффинные сорбенты для очистки плазмидной ДНК.

Принцип очистки сорбентами из серии Plasmid заключается в тиофильной адсорбции лигандов, которая позволяет разделять замкнутую спиральную плазмидную ДНК от других веществ.

Пример очистки плазмидной ДНК:

Vdo-chromatography media affinity

Предварительно активированные сорбенты.

Предварительно активированные сорбенты, также известные как промежуточные продукты активации аффинных сорбентов, получают путем связывания различных активных групп (спейсерных ветвей) с сефарозой различными способами конъюгирования. Активные группы в дальнейшем могут быть дополнительно конъюгированы с различными функциональными группами. Таким образом пользователи могут легко присоединять желаемые лиганды к пре-активированному сорбенту.

Характеристики предварительно активированных сорбентов:

CNBr Focurose 4FF имеет широкую область применения. Сорбент может напрямую конъюгировать с различными биомакромолекулами, содержащими несколько аминогрупп. Операция проста и эффективна, а также не влияет на биологическую активность биомолекул стабилизируя их при связывании с функциональной группой сорбента.
NHS Focurose4FF склонен к образованию амидной связи с белками (с хорошей химической стабильностью).
Epoxy Focurose4FF используется при необходимости работы в мягких условиях.

HIC

Гидрофобные хроматографические сорбенты.

При данном типе хроматографии белки разделяют на основе различия в их гидрофобности, т. е. обратимого взаимодействия между белками и гидрофобными группами на поверхности сорбента. Гидрофобность может увеличивается при высокой ионной силе, поэтому белки, связанные со сорбентом в среде с высокой ионной силой обычно элюируются при снижении ионной силы. Этот уникальный режим адсорбции-разделения делает гидрофобную хроматографию идеальным методом очистки образцов после высаливания сульфатом аммония или после ионного обмена и элюирования с высоким содержанием солей.

Vdo-chromatography media HIC

Меры предосторожности при использовании гидрофобных хроматографических сред:

Гидрофобное взаимодействие со средой зависит от типа и концентрации лиганда.
Следовательно, концентрация соли в буфере также варьируется при работе с разными гидрофобными сорбентами.
Температура и рН оказывают значительное влияние на гидрофобность белков. Поэтому во время гидрофобной хроматографии эти два параметра следует поддерживать постоянными.