Аналитические хроматографические колонки HPLC Column, Sepax

Имея более 100 хроматографических сорбентов и более 1000 типов различных колонок для жидкостной хроматографии, производимых собственными силами, компания Sepax накопила широкий спектр компетенций и знаний, позволяющих удовлетворить различные потребности наших клиентов в очистке широкого спектра низкомолекулярных и биофармацевтических образцов.

Скачать брошюру

Категории: Хроматографические колонки, Хроматография Бренд: Sepax

HPLC column_sepax

При изготовлении аналитических колонок проводятся:

Полная диагностика колонок на каждом этапе изготовления.
Испытания на стабильность и подтверждение характеристик колонок каждой партии в соответствии со спецификацией.
В процессе производства используется количественный метод выборки.
Тестирование продукции по монографии фармакопеи США (USP).
ЖХ/МС анализ продукции (LC/MS).

SEC

Механизм разделения SEC

Разделение основано на соотношении между молекулярной массой отделяемого компонента и размером пор матрицы неподвижной фазы. Подвижная фаза не влияет на разделение молекул на сорбенте. Неспецифическую адсорбцию целевого белка можно эффективно уменьшить, добавив в буфер хлорид натрия.

Характеристики разделения SEC

Возможность проведения быстрого анализа повышает эффективность обнаружения
Селективное извлечение биомакромолекул
Подвижная фаза проста и экологически безопасна. Позволяет работать с водорастворимыми солевыми растворами
Вводимый объем образца на колонку должен составлять < 10 % от объема слоя колонки, предпочтительно в пределах 5 %
Следует избегать присутствия твердых веществ в образцах, вводимых на колонку
Для гель-фильтрации вязкость образцов должна быть максимально снижена
При гель-фильтрации разделяемые вещества должны иметь соотношение молекулярных масс > 2

Стандартная кривая SRT SEC

Выбирайте хроматографическую колонку с подходящим линейным диапазоном молекулярных масс. MW образца, который Вам необходимо выделить должен находится в пределах линейного диапазона колонки.

Колонки: SRT, 4,6×300 мм, 5 мкм

Состав анализируемого образца:

Тиреоглобулин, 670 кДа.
γ-глобулин, 158 кДа.
БСА, 66 кД.
Овальбумин, 44 кД.
Миоглобин, 17.6 кДа.
Рибонуклеаза А, 13.7 кД.
В12, 1.35 кД.

Sepax SEC (водорастворимые образцы)

Тип	Размер частиц （мкм）	Размер пор (Å)	Диапазон разделения белков	Водорастворимые полимеры Диапазон разделения
SRT SEC-100	5	100	100-100 000	500-10 000
SRT SEC-150	5	150	500-150 000	500-25 000
SRT SEC-300	5	300	5 000-1 250 000	1 000-100 000
SRT SEC-500	5	500	15 000-5 000 000	2 500-500 000
SRT SEC-1000	5	1000	50 000-7 500 000	5 000-1 500 000
SRT SEC-2000	5	2000	>10 000 000	50 000-〉2 500 000
Zenix SEC-80	3	80	＜10 000	500-5 000
Zenix SEC-100	3	100	100-100 000	500-10 000
Zenix SEC-150	3	150	500-15 000	500-25 000
Zenix SEC-300	3	300	5 000-1 250 000	1000-100 000

Выбор ВЭЖХ колонки для гель-фильтрации (SEC)

Основные два фактора которые необходимо учитывать: растворимость образца и молекулярный вес аналита.

Аналит	Подходящий тип колонки
Белок	SRT/-C，Zenix/-C，Unix/-C，Nanofilm
Вирусный вектор	SRT 500，1000，2000
Антитела	SRT/Zenix/Unix 300
Нуклеиновые кислоты	SRT/-C，Zenix/-C
Гепарин / Полипептид	SRT/Zenix 100, 150, 300
Цефало-спорины	Mono GPC 50~100 (жирорастворимый образец）
Полимеры	SRT/Zenix (водорастворимый образец） Mono GPC (жирорастворимый образец）
Липиды	Mono GPC 50，100，150，300

IEX

Механизм разделения ионообменной хроматографии (IEX )

Разделение достигается за счет конкуренции между ионами образца и ионами подвижной фазы за взаимодействие с ионами противоположными зарядами на сорбенте-ионообменнике.

IEX

Характеристики IEX

Использование градиентного элюирования системы буферных солей в качестве подвижной фазы.
Величина удерживания и степень разделения компонентов в основном регулируются путем контроля значения pH и ионной силы подвижной фазы.
На катионообменных колонках задерживаются белки, которые имеют pI, превышающим pH подвижной фазы, тогда как белки с pI, меньшим или равным pH подвижной фазы, вымываются как пики растворителя. Последовательность пиков элюирующихся белков начинается с пика белка с самым низким значением pI; обратное верно для анионообменных колонок.

Выбор колонки Sepax IEX

Тип	Матрица	Размер частиц （мкм）	Диапазон pH	Образцы
Proteomix SCX	полистирол / дивинилбензол	1.7 ,3 ,5 ,10	2-12	pI＞7 белок, полипептид
Proteomix WCX				pI＞7 белок, полипептид
Proteomix SAX				pI＜7 белок, полипептид ДНК, РНК, олигонуклеотиды, сахариды
Proteomix WAX				pI＜7 белок, полипептид ДНК, РНК, олигонуклеотиды, сахариды
Proteomix CV-1				Специальная колонка для анализа биспецифических антител (BsAb)
Antibodix^TM				Специальная колонка для анализа моноклональных антител (mAb)

Функциональная группа:

WCX: -COOH, pKa 4.75 WAX: -N(C₂H₅)₂, pKa 11

SCX: -SO₃H, pKa < 1.0 SAX: -N⁺(CH₃)₃, pKa 13

Колонка: PEEK, Материал из нержавеющей стали

Аналит	Подходящий тип колонки
Белки	Proteomix WCX/SCX/WAX/SAX
Антитела	Antibodix WCX / Proteomix WCX, SCX
Полипептиды	Proteomix WCX/SCX/WAX/SAX
Нуклеиновые кислоты	Proteomix SAX
Водорастворимые полимеры	Proteomix SCX/WCX(base) / WAX/SAX(acid)

HIC

Механизм разделения с помощью HIC

Общее для методов HIC и RP. Основаны на различиях в гидрофобности каждого компонента и силе взаимодействия между гидрофобными группами в матрице неподвижной фазы.

Разница. По сравнению с HIC неподвижная фаза RP обладает более сильной гидрофобностью. Следовательно, при элюировании с RP колонки необходимо использовать органические растворители, такие как метанол, ацетонитрил. При работе с HIC-колонкой можно элюировать с использованием более мягкой солевой фазы. Мягкая элюирующая среда может поддержать стабильность биологических макромолекул.

Выбор колонки HIC от Sepax

Применение：

Анализ и очистка белков и полипептидов (в том числе синтетических полипептидов)
Анализ соотношения лекарство-антитело (DAR) для лекарств, связанных с антителами (не денатурированные условия)

Требование к образцу：

Целевой аналит и другие компоненты или примеси в образце должны отличаться по гидрофобности
Компоненты образца имеют хорошую растворимость в выбранной системе подвижной фазы.

Выбор колонки：

Если образец нестабилен в системе органических растворителей, предпочтительным является режим HIC.

RP

Механизм разделения с помощью RP

Proteomix^® RP Полимерная матрица	Силикагельная матрица
Proteomix® RP-300（размер пор: 300 Å）	Bio-C18, C8, C4（размер пор: 200Å/300 Å）
Proteomix® RP-500（размер пор: 500 Å）	HP-C18 (работает при 100% водной фазы)
Proteomix® RP-1000（размер пор: 1000 Å）	BR-C18 (работает при pH1.5~10.5）
Proteomix® RP-300（размер пор: 300 Å）	Bio-C18, C8, C4（размер пор: 200Å/300 Å）

Матрица Proteomix RP основана на сильно сшитых полистирол/дивинилбензольных (ПС/ДВБ) микросферах. Гидрофобные взаимодействия достигаются за счет взаимодействия с фенильными и поверхностно-модифицированными алкильными группами.

Преимущества полимерной матрицы:

По сравнению с силикагелем полимерная матрица более пригодна для разделения биологических молекул и имеет широкий диапазон pH (1-14)
Высокая термостойкость: до 80 ℃
Селективность и эффективное разделение белковых молекул и их родственных белковых фрагментов, таких как mAb и ADC

Применение RP:

Анализ значения DAR для ADC (полимерная матрица, подвижная фаза органической фазы)
Анализ пептидной карты, анализ содержания низкомолекулярных лекарств и т. д. (силикагель)

AFFINITY

Аффинная колонка – ProAqa Excel специально разработана для быстрого и точного количественного определения антител во время скрининга клеточных линий или оптимизации биопроцессов и контроля качества. Сорбент состоит изматрицы из однородного PS/DVB со средним размером частиц 20 мкм и размером пор 1000-2000 Å в и пришитым рекомбинантным белком А – лигандом, который может связываться с Fc-содержащими иммуноглобулинами, отличными от IgG3, и подходит для определение содержания Fc-иммуноглобулина в супернатанте культуры клеток СНО на разных уровнях.

Аффинная колонка – ProAqa Excel

ProAqa Excel	Технические особенности
Матрица	PS/DVB (20 мкм, 1000-2000 Å)
Лиганд	Рекомбинационный Protein A
Размер (внутренний диаметр × длина)	2.1 мм x 30 мм
Материал колонки	PEEK или нержавеющая сталь
Максимальное давление	200 бар
Диапазон pH	1.2-13.0
Максимальная скорость потока	5 мл/мин
Рекомендуемый расход	1-3 мл/мин
CIP	0.1 M NaOH
Связывающий буфер pH	6.6-7.5
Срок службы	>2000 инъекция
Стандартная инъекция	10 мкл
Концентрация обнаружения IgG	0.029-40 мг/мл*
Предел обнаружения	0.29 мкг